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高速離心機(jī)的幾種分離技術(shù)方法的你都了解嗎?

更新時(shí)間:2020-08-12      點(diǎn)擊次數(shù):1282
       高速離心機(jī)的幾種分離技術(shù)方法:
  A.差速離心:逐次增加離心力,每次可沉降樣品溶液中的一些組份。
  差速離心是一種較常用的方法。在這種方法中,離心管在開始時(shí)裝滿了均一的樣品溶液。通過在一定速度下一定時(shí)間的離心后,就可得到兩個(gè)部份:沉淀和上清液。
  通常在離心時(shí)把大部分不需要的大粒子沉降去掉。這時(shí)所需的組份大部分仍留在上清液中。然后將收集到的上清液以更高速度離心,把所需的粒子沉積下來。離心的時(shí)間要選擇得當(dāng),使大部份不需要的更小的粒子仍留在上清液中。對于得到的沉淀和上清液可以進(jìn)行進(jìn)一步的離心,直到達(dá)到所需要的分離純度為止。差速離心的特點(diǎn)是操作簡單,但分離純度不高。
  B.密度梯度離心法:可以同時(shí)使樣品中幾個(gè)或全部組份分離,具有很好的分辨率。
  1)速率區(qū)帶法:
  根據(jù)樣品中不同粒子所具有的不同的尺寸大小及沉降速度(S)。大致步驟如下:
  在離心管中裝入密度梯度溶液,溶液的密度從離心管頂部底部逐漸增加(正梯度)。
  將所需分離的樣品小心地加密度梯度溶液的頂部。高速離心機(jī)屬常規(guī)實(shí)驗(yàn)室用離心機(jī),廣泛用于生物,化學(xué),醫(yī)藥等科研教育和生產(chǎn)部門 ,它利用轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的強(qiáng)大離心力,分離液體與固體顆?;蛞后w混合物中各組分,適用于微量樣品快速分離合成。樣品在梯度溶液表面形成一負(fù)梯度。
  由于不同大小的粒子在離心力作用下,在梯度中移動的速度不一樣,所以經(jīng)過離心后會形成幾條分開的樣品區(qū)帶。冷凍離心機(jī)就是利用離心力使得需要分離的不同物料得到加速分離的機(jī)器。冷凍離心機(jī)有分為低速、高速冷凍離心機(jī),以及超速分析、制備兩用冷凍離心機(jī)等多種型號。
  注意:樣品粒子的密度大于梯度液注中任一點(diǎn)的密度。離心過程在區(qū)帶到達(dá)管子底部前停止。
  2)等密度(單位:g/cm3或kg/m3)離心法:
  根據(jù)粒子的不同密度來分離。離心過程中,粒子會移與它本身密度相同的地方形成區(qū)帶。
  密度樣度的選擇要使梯度的范圍包括所有待分離粒子的密度。樣品可以在密度梯度液粒上面或均勻分布在密度梯度中。經(jīng)離心后,樣品粒子達(dá)到它們的平衡點(diǎn)。
  注意:平衡后粒子的分離由其密度決定,與時(shí)間無關(guān),此時(shí)再改變離心轉(zhuǎn)速,只能改變區(qū)帶的相對位置。
  2.密度梯度分析法
  梯度介質(zhì)性質(zhì)與選擇:
  應(yīng)具備的性質(zhì) :
  梯度物質(zhì)的選擇原則是滿足分離方法的基本要求,一個(gè)理想的密度材料標(biāo)準(zhǔn)它應(yīng)是:
  所形成的溶液密度應(yīng)包括所需要的密度范圍。
  具有某些性質(zhì),如折射率,據(jù)此可測定它的濃度。
  所形成的溶液粘度低。
  不損傷所分離的樣品。
  離心分離后容易除去。
  不妨礙分離積分的分析。
 

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